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凋亡试剂盒的原理及现象分析点击次数:232 发布时间:2022-09-14

  凋亡试剂盒通常应用于培养的贴壁或悬浮细胞的细胞周期与细胞凋亡检测。如果用于组织的细胞周期与细胞凋亡检测,则必须把组织消化成单细胞状态,才可以进行检测。
 
  一、凋亡试剂盒的细胞凋亡原理:
 
  细胞凋亡普遍存在于生物界,既发生于生理状态下,也发生于病理状态下。细胞凋亡对胚胎发育及形态发生(morphogenesis)、组织内正常细胞群的稳定、机体的防御和免疫反应、疾病或中毒时引起的细胞损伤、老化、肿瘤的发生进展起着重要作用。
 
  在正常细胞中,磷脂酰丝氨酸(Phosphatidylserine,PS)位于细胞膜的内侧,但在细胞凋亡的早期,PS可从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面,暴露在细胞外环境中。Annexin-V是一种分子量为35.8KD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白,能与PS高亲和力特异性结合。将Annexin-V进行荧光素FITC标记,以标记了的Annexin-V作为荧光探针,利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡的发生。
 
  二、凋亡试剂盒的细胞凋亡现象:
 
  细胞发生凋亡时,由于胞浆和染色质浓缩、核碎裂,产生凋亡小体,使细胞的光散射性质发生变化。在细胞凋亡的早期,细胞对前向角光散射的能力显着降低,对侧向光散射的能力增加或没有变化。在细胞凋亡的晚期,前向和侧向光散射的信号均降低。因此可通过流式细胞仪测定细胞光散射的变化观察细胞凋亡情况。
 
  细胞凋亡过程的形态变化说明
 
  细胞凋亡是个复杂的过程,我们在了解分析它的同时在记录着它的细胞变化形态,由此我们将其变化的过程分为三个大的阶段:
 
  1.首先是是细胞体积缩小,胞浆凝缩,内质网变疏松并与胞膜融合,核糖体、线粒体等聚集,但结构无明显改变,染色质逐渐凝聚成新月状附在核膜周边,嗜碱性增强,核固缩呈均一的致密物,进而断裂,胞膜仍完整
 
  2.其次就是胞膜不断出芽、脱落,细胞变成数个大小不等的由膜包裹的凋亡小体(apoptotic bodies)。
 
  3.凋亡小体被周围具有吞噬功能的细胞如巨噬细胞、上皮细胞等吞噬、降解。在凋亡发生的全过程中,细胞膜一直保持完整,胞内容物不释放出来,所以不引起周围的炎症反应。同一组织中,不同细胞发生凋亡的过程并不同步。
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