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细胞免疫荧光实验步骤点击次数:8996 发布时间:2011-07-19

                                         细胞免疫荧光实验步骤

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1. 细胞一定要贴在玻片上(可以放入24孔板),为后面照像打基础。细胞密度适中,大约60-75%满片即可,否则容易脱片。

2. 取出细胞后用4%多聚甲醛固定15分钟,现用现配。(以下各步骤切毋使玻片干燥)

3. PBS冲洗

4. 0.1%Triton作用20分钟

5. PBS冲洗
 
6. 10%正常血清封闭10分钟

7. 加入一抗,4度孵育过夜(找个小瓶盖将小玻片支起来,抗体就不容易溢出),还要记住“砸片”,就是抗体从较高处落到片子上,以分布均匀。抗体稀释度1:60,较常用!

8. PBS冲洗4次,各5分钟

9加入荧光二抗,室温30分钟。抗体稀释度1:400,较常用!

10.  同8。

11. 90%甘油封片。也很关键阿,多封几次才有体会。

12. 避光保存,或到显微镜下观察。
 
 
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