技术文章

IL-4拮抗IFN的抗病毒活性测定点击次数:973 发布时间:2011-05-23

                                         IL-4拮抗IFN的抗病毒活性测定

www.runwelltac.com

        IL-4能阻断IFN对L929细胞的保护作用,其拮抗程度与IL-4浓度相关,据此可通过对L929细胞保护作用的抑制率来反映样本中IL-4的含量。
(1)、取生长良好的L929细胞倾去培养液,加入0.25%胰酶消化后,充分洗涤细胞,调整细胞浓度至1×105—3×105/mL,每孔加100uL,37℃,5%C02温箱中培养24h。
(2)、采用9—10日龄鸡胚,制备成纤维细胞单层培养,接种适量VSV病毒。当细胞病变达+++—++++时,收获病毒,并进行病毒TCID50测定。
(3)、将待检上清和rlL-4分别与4U/mL IFN混合,在L929细胞培养内加100uL。37~C,5%C02温箱中孵育24h。
(4)、VSV攻击:每孔加100uL病毒悬液,含200TCID;置37℃,5%C02温箱培养48h,待病毒对照孔病变达+++—++++,细胞对照正常时,测定结果。
(5)、将培养液全部倒出,用Hanks液洗3次;每孔加入100uL0.5%结晶紫染色液,染10—20rain弃去,Hanks液洗3次,加入95%酒精。放小型振荡器上振摇15min左右,待细胞内染料完全溶解。用分光光度计540nm波长测OD值,以准确客观地反映细胞存活数量。
(6)、注意事项:
①L929细胞在营养条件不良时,可呈圆形漂浮状,此时更换培养液可使其恢复为梭形贴壁细胞;
②L929细胞要均匀分散于培养板孔中,否则可能造成某个部位细胞过密,另一部分过稀,将影响细胞单层的形成。
电话:
13788993509
13788995069
021-64133189
传真:
021-64129208
陈小姐点击这里给我发消息
徐小姐点击这里给我发消息
朱小姐点击这里给我发消息
 
安全联盟站长平台

化工仪器网

推荐收藏该企业网站