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如何选择合适的蛋白酶抑制剂点击次数:857 发布时间:2017-04-10

   即使蛋白酶对细胞功能很重要,但你也有不想见到它们的时候。比如,在纯化蛋白质的时候,你可不想让蛋白酶大肆吞噬你的目标蛋白吧,特别是低丰度蛋白。如今,市场上有多种蛋白酶抑制剂可供选择,帮助你在必要时停止蛋白酶的活性。
  为了对付细胞和组织样品中存在的各种蛋白酶,抑制剂的选择也在不断增加。目前,主要有四种类型的蛋白酶,根据他们活性位点中的氨基酸命名:丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶和金属蛋白酶。蛋白酶抑制剂可以特异针对一种蛋白酶,也可以是广谱的。
  人们通常根据抑制剂作用的蛋白酶类型,以及它们可逆或不可逆,对蛋白酶抑制剂进行分类。如何选择和使用?这似乎是一个难题,光看名字就已经让人头晕了。下面让我们来听听专业人士的建议。
  从鸡尾酒开始
  蛋白酶抑制剂的选择,取决于每个用户的个性化实验,不过对于裂解细胞或匀浆组织的应用,抑制剂混合物(或者说鸡尾酒)通常是个比较保险的选择,可阻断不同的蛋白酶。zui的抑制剂就是两种混合物:Protease Inhibitor Cocktail Multipurpose以及Protease, Phosphatase & PMSF;这两者都适用于裂解液。“它们普遍适用,适合许多样品,无论是新鲜还是FFPE组织,抑或不同的物种,”的Sabrina Calabressi谈道。
  若研究人员希望保留目的蛋白,同时维持细胞健康,默克密理博的Chandra Mohan也建议使用抑制剂混合物。她建议选择针对四种蛋白酶的抑制剂,如默克密理博的Protease Inhibitor Cocktail III。它可抑制哺乳动物细胞和组织中的天冬氨酸、半胱氨酸和丝氨酸蛋白酶以及氨肽酶。
  有时,不那么特异的抑制剂似乎是个更好的选择。“在裂解细胞或制备组织匀浆液时,使用具有广谱特异性的抑制剂,”Mohan说。“它们应当快速反应,与蛋白酶不可逆结合,并在蛋白纯化后轻松去除。”
  尽管如此,选择困难症还是围绕着你。认为,尝试不同的类型是供应商的责任,而不是研究人员的。
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