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荧光显微镜观察细胞荧光染色点击次数:3025 发布时间:2011-09-15

                                        荧光显微镜观察细胞荧光染色

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一、荧光显微镜的成像原理

荧光显微镜是一种较为常用的的光学显微镜,其基本原理是利用一定波长的激发光对样品进行激发,使之产生一定波长的荧光,从而用于对样品结构或其组分进行定性、定位、定量观察检测。
什么是荧光?
物质中的电子吸收光的能量由低能状态转变为高能状态,再回到低能状态时释放出的光。
即:物质吸收短波光,发射出的长波光。
 
荧光的性质
保持固有的荧光特性
荧光波长>激发波长
荧光强度极小于激发光的强度
有不同程度的衰减
荧光强度取决于激发光强度、被检物浓度、荧光效率
荧光显微镜的优点和用途(生物秀仪器频道www.bbioo.com)
优点:
检出能力高
对细胞的刺激小
能进行多重染色
用途:
物体构造的观察
荧光的有无、色调比较进行物质判别
发荧光量的测定对物质定性、定量分析
实验目的与教学要求
1.掌握荧光显微镜的成像基本原理及其使用;
2.掌握暗视野显微镜的成像基本原理及其使用。
荧光素的特性
荧光显微镜技术在生命科学研究中的应用
1.对细胞结构或组分的定性、定位、半定量研究。
2.作为生物大分子筛选与鉴定的标记物。
二、暗视野显微镜的成像原理
通过特殊的暗视野聚光器,使照明光线改变途径,不直接进入物镜,而是倾斜地照射到样品上,由样品表面的绕射光线入射到物镜内,产生样品的衍射图象。
三、试剂与器材
青蛙、洋葱、人正常肝组织切片和脂肪肝组织切片(HE染色)
甲醇、1‰丫啶橙、滤纸、吸管、载玻片
荧光显微镜、暗视野显微镜、普通光学显微镜
四、实验内容和实验步骤
1.蛙血细胞染色观察:取少许蛙血→常规血涂片→凉干→甲醇固定10min→1‰丫啶橙染色5min→水洗→
室温
干燥(滤纸擦干玻片底面)→荧光显微镜观察(先低倍后高倍观察)(可在同一玻片上观察未荧光染色的血细胞)
2.取洋葱→撕取一小片内表皮→平面单层铺展于玻片上→室温凉干→1‰丫啶橙染色5min→水洗(用吸管,小心掉片)→室温干燥(或用滤纸擦干)
→荧光显微镜观察
3.暗视野显微镜观察蛙血细胞(示范)
4.观察人正常肝组织切片和脂肪肝组织切片(HE染色)
五、注意事项
荧光显微镜要在光线尽量暗的环境下观察。
使用荧光显微镜时要注意不要直接观察激发光源,保护眼睛。

暗视野显微镜要在光线尽量暗的环境下观察。

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