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DNA片段纯化常见问题点击次数:1774 发布时间:2011-05-23

                                              DNA片段纯化常见问题

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1、DNA回收率低
A、溶胶液用量过少
准确计算凝胶的重量,按比例加入溶胶液。
B、凝胶块未完全融化
加入溶胶液后,置于55℃~60℃进行水浴,如有必要加入更多量的溶胶液。
C、电泳缓冲液使用时间过长,不新鲜
换用新配制的电泳缓冲液。
D、片段过小,<200 bp
加入1倍体积的异丙醇。
E、片段>10kb
加入洗脱液后,将吸附柱置于60℃,温育15分钟后进行离心洗脱。
F、洗脱液使用不正确
 洗脱液pH在7.0~8.5之间时洗脱效果zui好,pH过高或者过低,都将显著影响洗脱效率,请使用试剂盒配送的洗脱液进行洗脱(10 mM Tris-HCL,pH8.5),使用ddH2O洗脱时请保证pH值在此范围内。
G、洗脱液加入位置不正确
使用较小洗脱体积洗脱时,洗脱液应加在膜的中央。
H、起始产物量低
若初始回收产物的量很低,应先富集,增大起始产物量。
2、未回收到DNA
DNA Wash Buffer中未加入乙醇
  加入规定用量的无水乙醇,使用后旋紧瓶盖,以防乙醇挥发
3、电泳时,样品飘出点样孔或后续酶反应实验不理想
乙醇残留:洗脱前,应确保乙醇已去除干净,可再次离心,以彻底去除残留的乙醇后在进行洗脱操作。
4、柱子堵塞
凝胶未完全融化:加入溶胶液后,置于55℃~60℃进行水浴,待凝胶完全融化,冷却至室温后再过柱。
电话:
13788993509
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021-64133189
传真:
021-64129208
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