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地高辛检测点击次数:1140 发布时间:2016-03-24

地高辛标记技术源于一种从洋地黄类植物(毛地黄和毛花毛地黄)中提取的类固醇物质—DigoxideninDIG)。由于洋地黄植物的花和叶片Digoxidenin在自然界中的*来源,因此抗DIG的抗体不会与其他的生物物质结合,从而可以满足特异性标记的需要。这一点,正式DIG胜于生物素的(Biotin)的地方—同样是小分子标记物,生物素广泛存在于各种组织中,对于灵敏度很高的标记检测实验来说,样品自身含有的内源生物素,就会对结果产生干扰。地高辛就能够很好地避免这个问题。

 

  1. 地高辛技术特点
    1. 可用于标记核苷酸或蛋白质
    2. 检测方法:显色法、荧光或化学发光法
    3. 安全环保,不接触放射性物质,不会对环境造成污染
    4. 曝光时间短,结果显示时间以分钟计算,无需几小时甚至几天的自显影过程
    5. 地高辛标记的探针至少可贮存一年以上,可一次大量制备
    6. 可轻松进行探针剥离和重探

 

2.  应用领域

地高辛系统能够安全地标记DNARNA或是寡聚核苷酸探针,这些探针可以广泛应用在:

  1. Southern blot,Northern blot,dot blot
  2. 菌斑杂交
  3. Microarray
  4. ELISA
  5. 原位杂交

 

3.  技术细节

DIG 通过一个含有11个碳原子的空间臂与尿嘧啶核苷酸上的C5位置相连,一定浓度的DIG标记的核苷酸可以通过DNA polymerase(E.coli DNA Polymerase, T4 DNA Polymerase, T7 DNA Polymerase, Reverse Transcriptase, Taq DNA Polymerase )、RNA polymerase (SP6, T3T7 RNA Polymerase)或是末端转移酶(Terminal Transferase)的作用掺入到核苷酸探针中;也可通过随即引物标记(random primed labeling, 缺口平移(nick translation),PCR3端标记/加尾或是体外转录制备带有DIG标记的探针。当然也可以通过化学合成的方法进行核苷酸的标记。

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