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R&D systems公司 ELISA 酶联吸附免疫法(四)点击次数:1020 发布时间:2015-01-09

R&D systems公司 ELISA 酶联吸附免疫法Q&A

问:R&D SystemsQuantikine试剂盒是否可用于组织匀浆(或其它未经检验的)样本?

答:很遗憾,R&D Systems尚未采用组织匀浆作为样本对Quantikine系列的试剂盒做效果验证。如果要决定试剂盒是否可用于未经检定的样本,实验者先做一个 “掺入和回收预试验"。简单来说,实验者将样本分为两份:一份中掺入一定量的试剂标准,然后做一稀释系列(一般稀释到1:16),再将掺入过的一份同未掺 入的一份相比。采用以下的公式来计算回收率(%):测试值(pg /毫升)/ 期待值(pg /毫升)x 100% = % 回收率。一般来说,回收率在80-120%可认为是可接受的。但是,可接受范围应由每一实验室自行决定。这种方法可用于检定未被R&D Systems检定的任何样本。我们还有更加详细的“掺入和回收"的实验步骤,可向我们的技术服务部索取。我们也可进一步查阅文献看一看是否有其他试验人 员用我们的产品做过不同的样本,或不同的属种。


问:加入稀释剂是否会将样本进一步稀释?

答:因为稀释剂是加入到所有的孔中,标准和被测样本都被同样稀释,所以样本的浓度可从标准曲线读出,而不需作稀释调整。


问:我是否可将标准曲线的两端延伸?

答:在任何情况下,我们都不支持超出确定范围的实验结果。在我们确定的测试范围,我们保证实验结果的可重复性。


问:为什么不将测试范围延伸到所述的灵敏度?

答:灵敏度是统计中大于零的可测到的zui低值。它是通过本底信号和试验的可变性计算出来的。灵敏度是将20个零复制物的中值加两个标准差从标准曲线换算成分析物的浓度。而zui低标准是我们可以放心的、仍可与标准曲线成直线相关的zui低点,因而是可定量的。


问:Quantikine试剂盒中的试剂是否可互换?

答:如果试剂盒(RD1-, RD5-, RD6-)中的稀释剂有相同的组件号和批量号,它们可以互换。R&D Systems做“整个试剂盒的质量控制",就是说,我们不支持不同批号之间的替代。在任何情况下,微孔板和共轭物都不可互换。


问:Quantikine试剂盒中的洗液是否可互换?

答:如果组件号相同,洗液在相同类型的试剂盒之间(普通试剂盒之间,或高灵敏度试剂盒之间)是可以互换的。但是,普通Quantikine试剂 盒中的洗液不能用于高灵敏度的试剂盒,在普通Quantikine试剂盒中的洗液含有磷酸,会干扰高灵敏度Quantikine试剂盒中由NADPH驱动 的信号扩增。


问:在某些实验中为什么必须使用聚丙烯(polypropylene)的试管做标准稀释?

答:有些细胞分子会粘到玻璃或聚苯乙烯(polystyrene),但不粘聚丙烯。


问:在Quantkine试剂盒中没有足够的RD5校正物来稀释我的细胞上清液,我该怎么办?

答:你可用细胞培养液来做起始的稀释,直接移液到微孔板的zui终的1:10稀释可使用校正物来稀释。

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