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细胞培养-培养细胞的取材点击次数:1429 发布时间:2010-03-01

细胞培养--培养细胞的取材

    人和动物体内绝大部分组织都可以在体外培养,但其难易程度与组织类型、分化程度、供体的年龄、原代培养方法等有直接关系,原代取材是进行组织培养的*步。

  取材的基本要求

   (1)取材的组织尽快培养。因故不能即时培养,可将组织浸泡于培养液内,放置于冰浴或4度冰箱中。如果组织块很大,应先将其切成1cm3以下的小块再低温保存,但时间不能超过24h。

   (2)取材时应严格无菌操作,用无菌包装的器皿或用事先消毒好的,带少许培养液的小瓶等便于携带的物品取材,取材过程中要尽量避免紫外线照射和接触化学试剂如碘、汞等。从消化道、周围有坏死组织等污染因素存在的区域取材时,为减少污染,可用含500~1000单位/ml的青链霉素BSS液漂洗5~10min,或用10%达克宁注射液冲洗浸泡10min再做培养.

   (3)取材和原代培养时,要用锋利的器械如刮脸刀片切碎组织,尽可能减少对细胞的机械损伤.

   (4)对于血液.脂肪.神经组织.结缔组织和 坏死组织,取材时要细心出去,修剪和切碎过程中,为避免组织干燥,可将其浸泡于少量培养液中.

   (5)原代培养,特别是正常细胞的培养,应采用营养丰富的培养液,添加胎牛血清,含量为10%~20%为宜.

   (6)一般来讲,胚胎组织较成熟个体的组织容易培养,分化底的较分化高的组织容易生长,肿瘤组织较正常组织容易培养.如无特殊要求,可采用易培养的组织进行培养,成功率较高.

   (7)为了便于以后鉴别原代组织的来源和观察细胞体外培养后与原组织的差异性,原代取材时要同时留好组织学标本和电镜标本.对组织的来源.部位.包括供体的一般情况要做详细的记录,以备以后查询.

    取材的基本器材和用品

   (1)眼科组织剪.弯镊.手术刀(用前消毒)

   (2)装有无血清培养基或Hank's液的小瓶

   (3)小烧杯(10ml,50ml)

   (4)培养皿(特殊用途物品详见后面章节)

    皮肤和粘膜的取材

   皮肤和粘膜是上皮细胞培养的重要组织来源.一般皮肤黏膜主要取自手术过程中切除的部分组织,如特殊需要也可酌情单独取材.方法似外科取断层皮片手术的操作,但面积一般2~3mm2即可.这样局部*痕.注意取材时不要用碘酒消毒.

    皮肤黏膜培养多是以获取上皮细胞为目的,因而无论何种方法取材都不要切取太厚并要尽可能去除所携带的皮下或者黏膜下组织.如欲培养成纤维细胞则反之,皮肤.粘膜分布在机体外部或与外界相通的部位,故表面细菌.霉菌很多.取材时要严格消毒,必要时用较高浓度的 抗菌素溶液漂洗.

     内脏和实体瘤的取材

   人和动物体内所发生的肿瘤及各脏器是较常用的培养材料.内脏除消化道外基本是无菌的,但有些实体瘤有坏死并向外破溃者可能被细菌污染.内脏和实体瘤取材时,一定要明确和熟悉自己所需要组织的类型和部位,要去除不需要的部分如血管.神经和组织间的结缔组织,取肿瘤组织时要尽可能取肿瘤细胞分布较多的部分,避开坏死液化部分.但有些复发性.浸润性较强的肿瘤较难取到较为纯净的瘤体组织,其肿瘤组织与结缔组织混杂在一起,培养后会有很多纤维细胞生长,给以后的培养工作增加困难.对于一些特殊细胞培养的取材,详见以后的介绍 。

    血液中的白细胞是很常用的培养材料,常用于进行染色体分析.淋巴细胞体外激活进行免疫治疗等.一般多采用静脉取血,微量时也可以从指尖或耳垂取血.为防止凝血重用肝素抗凝剂,抗凝剂的量以产生抗凝效果的zui小量为宜,量过大易导致溶血.肝素常用浓度为20U/ml,抽血前针管也要用浓度较高的肝素(500U/ml)湿润.抽血时要严格无菌.

    骨髓.羊水.胸水.腹水内细胞的取材

   要根据各种有关操作规程进行.详见以后的章节.这几种样品取材后一般不需要其它处理,离心后立即培养,不易低温保存.

     鼠胚组织的取材

    由于鼠胚组织取材方便,易于培养,同时与人类相近都是哺乳类动物,已成为较常用的培养材料.因为小鼠的毛中隐藏微生物较多,而且不易消毒.所以取材时更要注意无菌消毒,其无菌消毒一般采用以下方法进行:首先用引颈法杀死动物,然后将其整个浸入盛有75%酒精的烧杯中5min,注意时间不能太长以免酒精从口和其它孔道进入体内,影响组织活力.取出后放在消毒过的小木板上,用消毒过的图钉或大头钉将其固定.然后用眼科剪和止血钳剪开皮肤解剖取材.也可在酒精消毒后,在动物躯干中部环形剪开皮肤,用止血钳分别挟住两侧皮肤拉向头尾把动物反包,暴露躯干,然后在固定解剖 取材.区号的组织要放置在另一干净的平皿中或玻璃板上进行原代培养操作.动物消毒后的操作宜在超净台内或无菌环境中进行.

 

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