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蛋白酶的底物特异性(sigma的合成底物)点击次数:2410 发布时间:2009-11-18

    

蛋白酶的底物特异性(sigma的合成底物)

问:新筛选的蛋白酶,用sigma合成底物测其底物特异性,包括lys-pNA,phe-pNA,leu-pNA,ala-nitroanilide hydrochloride,glu-nitroanilide,但都没有显色,就是说没有酶活。 难道对这些位点都不切割吗?有没有可能有其他原因?合成小肽的长度对酶特异性影响大吗?另外,有一些底物是用dmso溶解的,我的酶不耐有机溶剂,但底物只占终体积的1/10,dmso会对我的酶产生影响吗?谢谢!

答:合成小肽的长度对酶活的影响是的。一直在做一个三肽酶,产物是 N 端三肽,实验中只能用 Xaa-Xaa-Xaa-pNA 来测定活性,其他长度一个也不行。如果这个蛋白酶是羧基肽酶,那就要与氨基肽酶连用测定活性。酶切位点的左右是什么性质的氨基酸也需要注意。先做个同源比对,看看类似的蛋白酶切的是什么底物。争取做到心中有数。多做一些底物,如果发现新的zui适底物,特别是氨基酸性质相差较远的时候,对写文章很有利。

 

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