蛋白酶的底物特异性（sigma的合成底物）

问：新筛选的蛋白酶，用sigma合成底物测其底物特异性，包括lys－pNA,phe－pNA,leu－pNA，ala－nitroanilide hydrochloride，glu－nitroanilide，但都没有显色，就是说没有酶活。 难道对这些位点都不切割吗？有没有可能有其他原因？合成小肽的长度对酶特异性影响大吗？另外，有一些底物是用dmso溶解的，我的酶不耐有机溶剂，但底物只占终体积的1/10,dmso会对我的酶产生影响吗？谢谢！

答：合成小肽的长度对酶活的影响是的。一直在做一个三肽酶，产物是 N 端三肽，实验中只能用 Xaa-Xaa-Xaa-pNA 来测定活性，其他长度一个也不行。如果这个蛋白酶是羧基肽酶，那就要与氨基肽酶连用测定活性。酶切位点的左右是什么性质的氨基酸也需要注意。先做个同源比对，看看类似的蛋白酶切的是什么底物。争取做到心中有数。多做一些底物，如果发现新的zui适底物，特别是氨基酸性质相差较远的时候，对写文章很有利。