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地高辛试剂盒/Roche地高辛标记试剂盒点击次数:9269 发布时间:2009-10-20

 

地高辛试剂盒/Roche地高辛标记试剂盒 的选择

DIG标记及检测试剂盒
DIG(地高辛)DNA标记及检测试剂盒
DIG DNA labeling and Detection Kit

原理:用DIG-dUTP为底物,随机掺入法进行DNA标记,通过酶联免疫杂交的方法检测。该试剂盒可以标记25次反应,每次标记的DNA量为10ug-20ug,并可做50张10×10cm膜的杂交和检测。

应用:非放射性DNA标记及检测试剂盒以检测0.1pg的同源DNA,能检测1ug哺乳动物DNA中的单拷贝基因。跟放射性标记系统比较,此试剂盒能快速得到实验结果,而且消除了放射性同位素的不安全问题。从DNA标记和杂交能见到检测结果,整个实验过程24小时内能完成。这试剂盒的灵敏度与特异性使它适用于所有的杂交技术以替代放射性同位素标记和放射自显影术。这个标记方法和检测系统适用于DNA—印迹转移、菌落杂交、噬斑杂交及原位杂交。

产品号 产品规格 厂商 价格$
1093657 Kit Roche 查询
DIG DNA 标记试剂盒
DIG DNA Labeling Kit
用DIG-11-dUTP对DNA作随机引物扩增法标记。带DIG标记的探针可用于各种类型膜杂交,标记的探针通过酶联免疫法检测。
产品号 产品规格 厂商 价格$
1175033 Kit(40个标记反应) Roche 查询
DIG 标记试剂
DIG High Prime
产品号 产品规格 厂商 价格$
1585606 160μ1(40个标记反应) Roche 查询
附:(原位杂交技术能够在细胞或组织内的实际位置显现基因及其表达产物,所以此技术已成为一种十分重要的研究工具。DIG系统能广泛应用于原位杂交技术,取代同位素方法。
DIGDNA标记及检测Starter Kit 1
DIG High Prime DNA Labeling and Detection Starter Kit 1

Roche公司现为用户提供一种新的DIG标记及检测试盒DIG High Prime DNA Labeling and Detection Kit I。与原有的DIG DNA Labeling and Detection kit(Cat.093657)比较,本产品有以下特点:

●能对10×10cm印迹膜作12个标记反应及24个显色检测反应,是DIG DNA Labeling and Detection Kit(Cat.093657)份量的一半,所以特别适合初用者及需处理较少量样品的用户使用。
●试剂盒采用的是DIG标记试剂(Cat.585606),其标记效率是标准DIG随机引物标记法的3-10倍,而且预混了标记需要的所有试剂,即开即用,令操作更简单和方便。
●试剂盒中还包括了DIG定量/对照试纸条,令您能在30分钟内只用小量试剂便可估计DIG标记探针的浓度,方便您取得理想的信噪比。
●用于显色的NBT/BCIP底物为预混的浓缩度,而封闭液则以10倍浓度形式供应,简化了操作程序。

产品号 产品规格 厂商 价格$
1745832 Kit Roche 查询
DIGDNA标记及检测Starter Kit∏
DIG High Prime DNA Labeling and Detection Starter Kit∏

对于需要使用化学发光法检测的用户,我公司现提供了此新的DIG标记及检测试剂盒。

与上述的StarterKit I不同,此新的StarterKit ∏所含的底物为CSPD,但它同样有以下特点:

●能对10×10cm印迹膜作12个标记反应及24个检测反应,所以特别适合初用者及需处理较少量样品的用户使用。
●包含DIG标记试剂,令标记效率更高,操作更方便。
●包括DIG定量/对照试纸条及NBT/BCIP浓缩液,令您更易估计探针浓度,从而取得理想的信噪比。

产品号 产品规格 厂商 价格$
1585614 Kit Roche 查询
DIG发光检测试剂盒(可做50张10×10cm膜检测反应)
DIG Luminescent Detection Kit(for nucleic acids)
产品号 产品规格 厂商 价格$
1363514 Kit Roche 查询
DIG核酸检测试剂盒
DIG Nucleic Acid Detection Kit
用DIG标记的核酸作探针,按常规方法进行杂交。可做40张膜检测反应。
产品号 产品规格 厂商 价格$
1175041 Kit Roche 查询
DIG系统是您理想的核酸标记及检测工具

经过近十年的开发和*化,DIG系统现已成为产品zui齐备,在国内外zui被接受和zui常被文献引述的非放射性系统,其优点包括:
●灵敏度高:在所有的应用中,DIG系统能提供与用同位素相同的灵敏度,例如在基因组Southern杂交时对单拷贝基因作常规检测。
●快 速:采用同位素需要3天才能完成的实验,DIG系统在2小时内便能完成。
●安 全:非放射性方法,不影响环境及个人健康。
●灵活:完备的产品系列,可配合各种不同需要,而且标记好的探针可保存超过一年,令您可随时进行杂交实验而无需重复标记探针。此外,您更可重复进行探针剥离和重探,进一步提高工作效率。
●方 便:不需要操作同位素的防护措施及处理废料的麻烦,也不象同位素,要提早计划订购。
●节 省:没有同位素衰变造成的浪费。

DIG寡核苷酸5′末端标记试剂盒
DIG Oligonucleotide 5′-End Labeling Set
产品号 产品规格 厂商 价格$
1480863 Set (10个标记反应) Roche 查询
PCR DIG 探针合成试剂盒
PCR DIG Probe Synthesis Kit
标记的探针可在Southem杂交后从5-10ug的人基因级别DNA检测出单拷贝基因,是从少量DNA模板制备大量探针的zui有效、的方法。
产品号 产品规格 厂商 价格$
1636090 Kit(25个标记反应) Roche 查询
DIG RNA标记试剂盒
DIG RNA Labeling Kit(SP6/T7)
RNA是由SP6或T7RNA聚合酶催化的体外转录反应里被标记的。在转录反应过程中,核苷酸类似物Digoxigenin-11-UTP(DIG-UTP)是被利用来替代UTP(或其它放射性标记了的核苷酸)的角色。在新合成的RNA中,约每25个碱基便掺入了DIG-UTP。可标记转录反应2×10标记反应后,DIG-标记RNA可用于各种杂交技术,包括:
●Northern印迹 ●Southern印迹 ●Dot/Slot印迹
●菌落筛选 ●噬菌斑杂交 ●原位杂交
产品号 产品规格 厂商 价格$
1175025 Kit Roche 查询
DIG 系统在膜杂交中的应用:点杂交、常规Southern杂交、使用RNA探针Northern杂交。如需相关资料说明书,查询!
DIG标记反应试剂
抗地高辛(DIG)碱性磷酸酶复合物Anti-DIG-AP
产品号 产品规格 厂商 价格$
1093274 150u(200ul) Roche 查询
CSPD化学发光底物
CSPD Chemiluminescence Substrate
●背景低,15分钟曝光即可获得清晰的结果。
产品号 产品规格 厂商 价格$
1655884 1ml Roche 查询
CDP-StarTM化学发光底物CDP-StarTM
Chemiluminescence Substrate

●是目前zui快速、zui灵敏的化学发光底物,曝光时间只需15-60秒。
●是以下操作的理想底物:
●检测哺乳动物的单拷贝基因。
●在Northern杂交以RNA探针检测稀有的mRNA。
●检测极少量的靶DNA,如制作指纹图谱及法医分析。
产品号 产品规格 厂商 价格$
1685627 1ml Roche 查询
DIG对照试纸条
DIG Control Teststrips

●DIG对照和定量试纸条(Cat.669958)能方便估计DIG标记探针的浓度,以取得理想的信嗓比。
●省时:能在30分钟内测定DIG标记DNA或RNA的浓度。
●令您在估计探针产量时,可节省大量试剂。
产品号 产品规格 厂商 价格$
1669966 25条 Roche 查询
DIG DNA标记混合物
DIG DNA Labeling Mix
产品号 产品规格 厂商 价格$
1277065 50ul(25个反应) Roche 查询
DIG 简便杂交液
DIG Easy-Hyb

●预混、无毒(不含甲酰胺)、即开即用的杂交液。
●省时:能大量减少杂交时间,令您可在一天内完成常规的Southern Blot或文库筛选。
●使用方便:只要将DIG标记探针加进DIG Easy-Hyb.无需再进行任何*化处理。
●适用范围广:适用于DIG系统的各种膜杂交,可采用多种不同的温度及任何类型的探针(但在原位杂交的效果有待验证)。
●杂交效果好,背景低,更适宜做多次杂交。
产品号 产品规格 厂商 价格$
1603558 500ml Roche 查询
DIG 清洗及阻断缓冲液组合
DIG Wash and Block Buffer Set
●是适用清洗、阻断及检测的浓缩液。
●使用前稀释即可,即使阻断试剂亦是预制的。 
●经过消毒及检测,确保不含DNase,RNase及污染物
●包含以马来酸为基础的缓冲液,以降低Northern Blot的背景,亦能改善其它应作用中的检测结果。
产品号 产品规格 厂商 价格$
1585762 1set(30 blots) Roche 查询
阻断试剂
Blocking Reagent
产品号 产品规格 厂商 价格$
1096176 50g Roche 查询
DIG标记的UTP
DIG-11-UTP
产品号 产品规格 厂商 价格$
1209256 250nmol(25μl) Roche 查询
DIG标记的dUTP
DIG-11-dUTP
产品号 产品规格 厂商 价格$
1093088 25nmol(25μl) Roche 查询
DIG标记的ddUTP
DIG-11-ddUTP
产品号 产品规格 厂商 价格$
1363905 25nmol(25μl) Roche 查询
尼龙杂交转印膜,带正电荷
Nylon Membranes, Positively Charged
因其带正电荷,能紧密结合DNA而使背景降至zui低,且能迅速转移和结合DNA,较高机械强度的膜能进行多次探针剥离及重杂交。
产品号 产品规格 厂商 价格$
1209299 20张(10×15cm) Roche 查询`
1417240 1卷(30cm×3m) Roche 查询
1699075 50张(82mm直径圆片) Roche 查询
1699083 50张(132mm直径圆片) Roche 查询
配合原位杂交技术发展的先进DIG产品
原位杂交技术的发展迅速,亦不断推出新的产品配合新的研究方向,除了各种不同的抗体复合物外,还提供以下产品:
DNA探针,人染色体特异
罗氏(原宝灵曼)现供应多种不同的人染色体特异DIG标记探针,方便您进行荧光原位杂交(FISH)。罗氏公司的探针为包含人卫星DNA的质粒,在严格的条件下,每个探针只在原位与目的染色体的着丝粒杂交。除了供应DIG探针,方便以抗DIG-荧光色素作较灵敏的间接检测外,还提供荧光素标记的探针作直接检测。这些探针可用于:
●鉴别在中期散开物或新间期核阶段的个别染色体
●鉴别非整倍体细胞,杂交细胞肿瘤
●染色体作图研究
PRINS反应组合:
PRINS(Primed in Site Labeling)可替代传统的原位杂交方法,只须几个步骤便能快速鉴别人染色体。罗氏公司的PRINS反应组合,结合PRINS与DIG技术,令您能准确地在原位对特异人染色体定位。人染色体首先被变性,与无标记的序列特异寡核苷酸退火,利用此退火的寡核苷酸作引物,可进行DIG-dUTP的标记反应,之后便可对DIG标记作检测。PRINS反应组合的特点包括:
●灵活:提供个别的特异引物配合您的需要,而且可方便dTTP的浓度,提高灵敏度,更可与标准的原位杂交技术结合,取得更多资料
●使用方便
●可靠:经过应用于人染色体的测试,确保能取得可靠的结果
操作DIG的系统的技术提示
DIG系统具有安全、方便、快捷、灵活、灵敏度高等优点,而且DIG系统所涉及的操作步骤基本上与同位素方法法同,用户要取得理想的实验结果并不困难,但有一些事项必须特别注意,以下列出了一些技术提示
[Ⅰ]模板的制备
-须作CsC1-酚-氯仿-乙醇抽提(或zui低限度作酚-氯仿-乙醇抽提)纯化模板。
-插入子没有载体序列,以避免交叉杂交。
-玻璃奶方法纯化得到的核酸,须在经过酚-氯仿-乙醇的抽提后,才可用于标记(High prime)。
[Ⅱ]标记
-在使用随机引物标记法时,须留意变性步骤要在水浴中进行,并须立刻冷却。
-在每次标记后都必须检测标记效率(可用产品DIG定量试纸条Cat.669958和对照试纸条1669966)。
-如在标记前模板未经前述步骤纯化,在杂交前建议对探针进行纯化。可利用蛋白酶K作处理,并在变性及加入预先加温的DIG简便杂交液(不可用含封阻试剂的缓冲液)之后以0.45um醋酸纤维素滤膜过滤。
[Ⅲ]印迹
-应尽量采用罗氏的带正电杂交膜,以降低背景和得到*的信噪比。
-处理杂交膜时必须特别小心,并须使用无粉末手套。
-应根据不同的核酸种类,采用合适的转移条件。
[Ⅳ]杂交
-须根据GC含量及同源性计算应采用的杂交温度。
-在预杂交及zui后清洗之间的所有时间,杂交膜均应保持湿润。
-可使用杂交袋或烘箱,但不可使用无盖的盘。
-在封闭杂交袋前,必须将杂交液中的气泡清除。
-切勿使用过量的探针,以避免过高的背景。一般DNA探针浓度为25ng/ml,RNA探针则为100ng/ml,如使用CDP-Star作底物,探针浓度应减低一半或以上。
-应尽量采用DIG简便杂交液。
-如作Northern印迹:
●须使用十分严格的条件。
●特别建议采用DIG简便杂交液。
●应尽量使用RNA探针,因为用DNA探针产生的讯号弱50-100倍。
[Ⅴ]检测
-在使用Anti-DIG-AP前,应在微离心机以10000rpm离心5分钟,然后在表面抽取该抗体使用。
-如要保存经稀释的化学发光底物,应将它消毒过滤,并中入0.1M叠氮化钠。
-在加入化学发光底物前应避免有过量的Buffer3留在膜上,可使用已消毒的Whatman纸,在120C烘2小时轻轻将膜稍为弄干或直接让Buffer3滴出。
DIG标记及检测试剂盒
DIG(地高辛)DNA标记及检测试剂盒
DIG DNA labeling and Detection Kit

原理:用DIG-dUTP为底物,随机掺入法进行DNA标记,通过酶联免疫杂交的方法检测。该试剂盒可以标记25次反应,每次标记的DNA量为10ug-20ug,并可做50张10×10cm膜的杂交和检测。

应用:非放射性DNA标记及检测试剂盒以检测0.1pg的同源DNA,能检测1ug哺乳动物DNA中的单拷贝基因。跟放射性标记系统比较,此试剂盒能快速得到实验结果,而且消除了放射性同位素的不安全问题。从DNA标记和杂交能见到检测结果,整个实验过程24小时内能完成。这试剂盒的灵敏度与特异性使它适用于所有的杂交技术以替代放射性同位素标记和放射自显影术。这个标记方法和检测系统适用于DNA—印迹转移、菌落杂交、噬斑杂交及原位杂交。

产品号 产品规格 厂商 价格$
1093657 Kit Roche 查询
DIG DNA 标记试剂盒
DIG DNA Labeling Kit
用DIG-11-dUTP对DNA作随机引物扩增法标记。带DIG标记的探针可用于各种类型膜杂交,标记的探针通过酶联免疫法检测。
产品号 产品规格 厂商 价格$
1175033 Kit(40个标记反应) Roche 查询
DIG 标记试剂
DIG High Prime
产品号 产品规格 厂商 价格$
1585606 160μ1(40个标记反应) Roche 查询
附:(原位杂交技术能够在细胞或组织内的实际位置显现基因及其表达产物,所以此技术已成为一种十分重要的研究工具。DIG系统能广泛应用于原位杂交技术,取代同位素方法。
DIGDNA标记及检测Starter Kit 1
DIG High Prime DNA Labeling and Detection Starter Kit 1

Roche公司现为用户提供一种新的DIG标记及检测试盒DIG High Prime DNA Labeling and Detection Kit I。与原有的DIG DNA Labeling and Detection kit(Cat.093657)比较,本产品有以下特点:

●能对10×10cm印迹膜作12个标记反应及24个显色检测反应,是DIG DNA Labeling and Detection Kit(Cat.093657)份量的一半,所以特别适合初用者及需处理较少量样品的用户使用。
●试剂盒采用的是DIG标记试剂(Cat.585606),其标记效率是标准DIG随机引物标记法的3-10倍,而且预混了标记需要的所有试剂,即开即用,令操作更简单和方便。
●试剂盒中还包括了DIG定量/对照试纸条,令您能在30分钟内只用小量试剂便可估计DIG标记探针的浓度,方便您取得理想的信噪比。
●用于显色的NBT/BCIP底物为预混的浓缩度,而封闭液则以10倍浓度形式供应,简化了操作程序。

产品号 产品规格 厂商 价格$
1745832 Kit Roche 查询
DIGDNA标记及检测Starter Kit∏
DIG High Prime DNA Labeling and Detection Starter Kit∏

对于需要使用化学发光法检测的用户,我公司现提供了此新的DIG标记及检测试剂盒。

与上述的StarterKit I不同,此新的StarterKit ∏所含的底物为CSPD,但它同样有以下特点:

●能对10×10cm印迹膜作12个标记反应及24个检测反应,所以特别适合初用者及需处理较少量样品的用户使用。
●包含DIG标记试剂,令标记效率更高,操作更方便。
●包括DIG定量/对照试纸条及NBT/BCIP浓缩液,令您更易估计探针浓度,从而取得理想的信噪比。

产品号 产品规格 厂商 价格$
1585614 Kit Roche 查询
DIG发光检测试剂盒(可做50张10×10cm膜检测反应)
DIG Luminescent Detection Kit(for nucleic acids)
产品号 产品规格 厂商 价格$
1363514 Kit Roche 查询
DIG核酸检测试剂盒
DIG Nucleic Acid Detection Kit
用DIG标记的核酸作探针,按常规方法进行杂交。可做40张膜检测反应。
产品号 产品规格 厂商 价格$
1175041 Kit Roche 查询
DIG系统是您理想的核酸标记及检测工具

经过近十年的开发和*化,DIG系统现已成为产品zui齐备,在国内外zui被接受和zui常被文献引述的非放射性系统,其优点包括:
●灵敏度高:在所有的应用中,DIG系统能提供与用同位素相同的灵敏度,例如在基因组Southern杂交时对单拷贝基因作常规检测。
●快 速:采用同位素需要3天才能完成的实验,DIG系统在2小时内便能完成。
●安 全:非放射性方法,不影响环境及个人健康。
●灵活:完备的产品系列,可配合各种不同需要,而且标记好的探针可保存超过一年,令您可随时进行杂交实验而无需重复标记探针。此外,您更可重复进行探针剥离和重探,进一步提高工作效率。
●方 便:不需要操作同位素的防护措施及处理废料的麻烦,也不象同位素,要提早计划订购。
●节 省:没有同位素衰变造成的浪费。

DIG寡核苷酸5′末端标记试剂盒
DIG Oligonucleotide 5′-End Labeling Set
产品号 产品规格 厂商 价格$
1480863 Set (10个标记反应) Roche 查询
PCR DIG 探针合成试剂盒
PCR DIG Probe Synthesis Kit
标记的探针可在Southem杂交后从5-10ug的人基因级别DNA检测出单拷贝基因,是从少量DNA模板制备大量探针的zui有效、的方法。
产品号 产品规格 厂商 价格$
1636090 Kit(25个标记反应) Roche 查询
DIG RNA标记试剂盒
DIG RNA Labeling Kit(SP6/T7)
RNA是由SP6或T7RNA聚合酶催化的体外转录反应里被标记的。在转录反应过程中,核苷酸类似物Digoxigenin-11-UTP(DIG-UTP)是被利用来替代UTP(或其它放射性标记了的核苷酸)的角色。在新合成的RNA中,约每25个碱基便掺入了DIG-UTP。可标记转录反应2×10标记反应后,DIG-标记RNA可用于各种杂交技术,包括:
●Northern印迹 ●Southern印迹 ●Dot/Slot印迹
●菌落筛选 ●噬菌斑杂交 ●原位杂交
产品号 产品规格 厂商 价格$
1175025 Kit Roche 查询
DIG 系统在膜杂交中的应用:点杂交、常规Southern杂交、使用RNA探针Northern杂交。如需相关资料说明书,查询!
DIG标记反应试剂
抗地高辛(DIG)碱性磷酸酶复合物Anti-DIG-AP
产品号 产品规格 厂商 价格$
1093274 150u(200ul) Roche 查询
CSPD化学发光底物
CSPD Chemiluminescence Substrate
●背景低,15分钟曝光即可获得清晰的结果。
产品号 产品规格 厂商 价格$
1655884 1ml Roche 查询
CDP-StarTM化学发光底物CDP-StarTM
Chemiluminescence Substrate

●是目前zui快速、zui灵敏的化学发光底物,曝光时间只需15-60秒。
●是以下操作的理想底物:
●检测哺乳动物的单拷贝基因。
●在Northern杂交以RNA探针检测稀有的mRNA。
●检测极少量的靶DNA,如制作指纹图谱及法医分析。
产品号 产品规格 厂商 价格$
1685627 1ml Roche 查询
DIG对照试纸条
DIG Control Teststrips

●DIG对照和定量试纸条(Cat.669958)能方便估计DIG标记探针的浓度,以取得理想的信嗓比。
●省时:能在30分钟内测定DIG标记DNA或RNA的浓度。
●令您在估计探针产量时,可节省大量试剂。
产品号 产品规格 厂商 价格$
1669966 25条 Roche 查询
DIG DNA标记混合物
DIG DNA Labeling Mix
产品号 产品规格 厂商 价格$
1277065 50ul(25个反应) Roche 查询
DIG 简便杂交液
DIG Easy-Hyb

●预混、无毒(不含甲酰胺)、即开即用的杂交液。
●省时:能大量减少杂交时间,令您可在一天内完成常规的Southern Blot或文库筛选。
●使用方便:只要将DIG标记探针加进DIG Easy-Hyb.无需再进行任何*化处理。
●适用范围广:适用于DIG系统的各种膜杂交,可采用多种不同的温度及任何类型的探针(但在原位杂交的效果有待验证)。
●杂交效果好,背景低,更适宜做多次杂交。
产品号 产品规格 厂商 价格$
1603558 500ml Roche 查询
DIG 清洗及阻断缓冲液组合
DIG Wash and Block Buffer Set
●是适用清洗、阻断及检测的浓缩液。
●使用前稀释即可,即使阻断试剂亦是预制的。 
●经过消毒及检测,确保不含DNase,RNase及污染物
●包含以马来酸为基础的缓冲液,以降低Northern Blot的背景,亦能改善其它应作用中的检测结果。
产品号 产品规格 厂商 价格$
1585762 1set(30 blots) Roche 查询
阻断试剂
Blocking Reagent
产品号 产品规格 厂商 价格$
1096176 50g Roche 查询
DIG标记的UTP
DIG-11-UTP
产品号 产品规格 厂商 价格$
1209256 250nmol(25μl) Roche 查询
DIG标记的dUTP
DIG-11-dUTP
产品号 产品规格 厂商 价格$
1093088 25nmol(25μl) Roche 查询
DIG标记的ddUTP
DIG-11-ddUTP
产品号 产品规格 厂商 价格$
1363905 25nmol(25μl) Roche 查询
尼龙杂交转印膜,带正电荷
Nylon Membranes, Positively Charged
因其带正电荷,能紧密结合DNA而使背景降至zui低,且能迅速转移和结合DNA,较高机械强度的膜能进行多次探针剥离及重杂交。
产品号 产品规格 厂商 价格$
1209299 20张(10×15cm) Roche 查询`
1417240 1卷(30cm×3m) Roche 查询
1699075 50张(82mm直径圆片) Roche 查询
1699083 50张(132mm直径圆片) Roche 查询
配合原位杂交技术发展的先进DIG产品
原位杂交技术的发展迅速,亦不断推出新的产品配合新的研究方向,除了各种不同的抗体复合物外,还提供以下产品:
DNA探针,人染色体特异
罗氏(原宝灵曼)现供应多种不同的人染色体特异DIG标记探针,方便您进行荧光原位杂交(FISH)。罗氏公司的探针为包含人卫星DNA的质粒,在严格的条件下,每个探针只在原位与目的染色体的着丝粒杂交。除了供应DIG探针,方便以抗DIG-荧光色素作较灵敏的间接检测外,还提供荧光素标记的探针作直接检测。这些探针可用于:
●鉴别在中期散开物或新间期核阶段的个别染色体
●鉴别非整倍体细胞,杂交细胞肿瘤
●染色体作图研究
PRINS反应组合:
PRINS(Primed in Site Labeling)可替代传统的原位杂交方法,只须几个步骤便能快速鉴别人染色体。罗氏公司的PRINS反应组合,结合PRINS与DIG技术,令您能准确地在原位对特异人染色体定位。人染色体首先被变性,与无标记的序列特异寡核苷酸退火,利用此退火的寡核苷酸作引物,可进行DIG-dUTP的标记反应,之后便可对DIG标记作检测。PRINS反应组合的特点包括:
●灵活:提供个别的特异引物配合您的需要,而且可方便dTTP的浓度,提高灵敏度,更可与标准的原位杂交技术结合,取得更多资料
●使用方便
●可靠:经过应用于人染色体的测试,确保能取得可靠的结果
操作DIG的系统的技术提示
DIG系统具有安全、方便、快捷、灵活、灵敏度高等优点,而且DIG系统所涉及的操作步骤基本上与同位素方法法同,用户要取得理想的实验结果并不困难,但有一些事项必须特别注意,以下列出了一些技术提示
[Ⅰ]模板的制备
-须作CsC1-酚-氯仿-乙醇抽提(或zui低限度作酚-氯仿-乙醇抽提)纯化模板。
-插入子没有载体序列,以避免交叉杂交。
-玻璃奶方法纯化得到的核酸,须在经过酚-氯仿-乙醇的抽提后,才可用于标记(High prime)。
[Ⅱ]标记
-在使用随机引物标记法时,须留意变性步骤要在水浴中进行,并须立刻冷却。
-在每次标记后都必须检测标记效率(可用产品DIG定量试纸条Cat.669958和对照试纸条1669966)。
-如在标记前模板未经前述步骤纯化,在杂交前建议对探针进行纯化。可利用蛋白酶K作处理,并在变性及加入预先加温的DIG简便杂交液(不可用含封阻试剂的缓冲液)之后以0.45um醋酸纤维素滤膜过滤。
[Ⅲ]印迹
-应尽量采用罗氏的带正电杂交膜,以降低背景和得到*的信噪比。
-处理杂交膜时必须特别小心,并须使用无粉末手套。
-应根据不同的核酸种类,采用合适的转移条件。
[Ⅳ]杂交
-须根据GC含量及同源性计算应采用的杂交温度。
-在预杂交及zui后清洗之间的所有时间,杂交膜均应保持湿润。
-可使用杂交袋或烘箱,但不可使用无盖的盘。
-在封闭杂交袋前,必须将杂交液中的气泡清除。
-切勿使用过量的探针,以避免过高的背景。一般DNA探针浓度为25ng/ml,RNA探针则为100ng/ml,如使用CDP-Star作底物,探针浓度应减低一半或以上。
-应尽量采用DIG简便杂交液。
-如作Northern印迹:
●须使用十分严格的条件。
●特别建议采用DIG简便杂交液。
●应尽量使用RNA探针,因为用DNA探针产生的讯号弱50-100倍。
[Ⅴ]检测
-在使用Anti-DIG-AP前,应在微离心机以10000rpm离心5分钟,然后在表面抽取该抗体使用。
-如要保存经稀释的化学发光底物,应将它消毒过滤,并中入0.1M叠氮化钠。
-在加入化学发光底物前应避免有过量的Buffer3留在膜上,可使用已消毒的Whatman纸,在120C烘2小时轻轻将膜稍为弄干或直接让Buffer3滴出。

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