技术文章

荧光定量PCR八联管常见问题：蒸发与污染的预防技巧点击次数：19 更新时间：2025-07-21

　　荧光定量PCR八联管的蒸发与污染是导致实验失败的主要原因，尤其在高通量检测中，微小的误差可能引发整板数据失效。掌握针对性的预防技巧，是保障实验准确性的关键。​
 
　　蒸发问题的核心在于密封性能的把控。选择与八联管匹配的专用密封盖(建议同品牌配套)，硅胶材质垫片的硬度需在50-60 Shore A之间，过软易粘连管壁，过硬则密封不严。盖盖时采用“对角按压法”：先按压第1管和第8管，再依次按压中间位置，确保每个管盖均匀贴合，较后用专用压盖器加固(压力设定0.3-0.5MPa)，避免人工按压力度不均导致的局部泄漏。对于384孔板衍生的八联管，需检查管盖边缘是否有毛刺，若存在微小缺口，需立即更换整板，防止升温时蒸汽从缺口逸出。​
 
　　温度梯度引发的蒸发可通过实验设计规避。PCR反应中，盖子温度应高于反应液温度5-10℃(如反应较高温95℃时，盖子温度设为105℃)，形成“温度屏障”阻止液体上升。升温速率控制在2-3℃/s，避免因剧烈升温导致管内压力骤增。若使用无热盖仪器，需在管内添加20μL矿物油(与反应体系互不相溶)，但需注意油层厚度一致(误差≤2μL)，否则会影响荧光信号穿透。​
 
　　污染预防需建立全流程防护体系。开封新八联管时，避免手部接触管口内侧，建议佩戴无粉手套并使用镊子取放。分装反应液采用“反向移液法”：吸液时多吸10%体积，排液时保留少量液体在吸头内，减少气溶胶产生。每处理完一个样品，需更换吸头并对工作台面消毒(75%酒精擦拭后紫外照射30分钟)。​
 
　　扩增产物污染的清除依赖严格的分区操作。试剂准备区、样本处理区、扩增区需独立，八联管在扩增完成后不得返回前两区。若怀疑发生污染，可用10%次氯酸钠浸泡八联管架30分钟，或使用DNA酶喷雾(含1U/μL DNase I)处理台面，再用紫外灯(254nm)近距离照射60分钟(需覆盖所有角落)。​
 
　　日常储存与维护可降低潜在风险。八联管需在干燥环境中储存(相对湿度<60%)，避免冷藏后取出时因结露导致的污染；未用完的八联管需密封在铝箔袋中，内置干燥剂(变色硅胶需每月更换)。定期检查管底平整度，将八联管放在水平台上，用塞尺测量较大间隙应≤0.02mm，否则会导致受热不均加剧蒸发。​
 

 

　　通过上述措施，可使荧光定量PCR八联管的蒸发率控制在<1%，污染发生率降低至0.1%以下，为荧光定量PCR实验提供稳定可靠的载体保障。
电话：
13788993509
13788995069
021-64133189
传真:
021-64129208
陈小姐点击这里给我发消息
徐小姐点击这里给我发消息
朱小姐点击这里给我发消息
 
安全联盟站长平台

化工仪器网

中级会员

中级会员

第18年
推荐收藏该企业网站