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正确选择流式抗体及搭配荧光素点击次数:1988 发布时间:2011-10-27

                                      选择合适的流式抗体及流式抗体搭配荧光素的原则

如何选择流式抗体:www.biomart.cn/runwell/index.htm

*、选择流式抗体要看清楚抗的是你的目标蛋白质,目标蛋白的物种不要搞错了,有些抗体对好几个物种的目标蛋白有反应,重要的是对你的实验有没有影响。
第二、抗体的物种是小鼠,大鼠,兔子还是什么。以备不时之需,还是选择你有匹配二抗。如果抗体还能够做荧光染色啊,western blot啊用途多了更好。
第三、选择流式抗体还要看荧光的颜色的选择:一是你的流式仪一定要能读,二是跟你需要counterstain的其他流式抗体错开频率。
第四、抗体的球蛋白亚型。因为要根据这个选择isotype对照用抗体。每个抗体分子携带的荧光分子数量也要一样才行。是一个isotype你的好几个抗体都能用,就省了事了。
第五、到底能测试多少样品。有些产品介绍没说清楚,可以根据推荐的浓度计算一下。一是这样才看出价格高低,二是根据自己需要选择大支还是小支.买多了过期也是浪费。
另外,选择流式抗体时还可以看制作抗体所用的抗原是什么,有的是肿瘤组织提取液,有的是重组蛋白,有的是肽链片断。选用哪个跟你的实验用途有关。有些蛋白质有很多亚型,也要注意是否测试过跟那些亚型起反应。

流式抗体搭配流式荧光素主要有2个原则:www.runwelltac.com


*,每个通道只能选择1种荧光素。
第二,各个通道之间的荧光素可以随意搭配,因此需要注意:
1、流式抗体每个通道只能选择1种荧光素。以Calibur为例说明,Calibur的FL1通道选择了Alexa Fluro488就不能选FITC ,或者选择了FITC就不能选择AlexaFluro488。Calibur的FL3通道尽管能检测PE-Texas Red, PE-Cy5, PerCP, PerCP-Cy5.5, PE-Cy7五个荧光素,但是我们搭配的时候只能选择其中1个。
2、各个通道之间的荧光素可以随意搭配:如果客户的流式细胞仪能做4个通道,在第1个原则之下,那么每个通道随便选出1个荧光素就可以组合成4个颜色。以2跟激光的Calibur为例,Calibur各个荧光素之间可以搭配出16种组合。比如常用的搭配是F I T C( F L 1 )+P E(F L 2)+PerCP(FL3)+APC(FL4), 这个搭配组合可以更改成Alex Fluro(FL1)+PE(FL2)+PerCP(FL3)+APC(FL4), 或者FITC(FL1)+PE(FL2)+PerCP(FL3)+Alex Fluro(FL4),或者FITC(FL1)+PE(FL2)+PE-Cy5(FL3)+APC(FL4)等等。总之,在第1原则之下,我们可以随意搭配和组合各个荧光素。但是需要注意的是,APC和PE-Cy5一起使用的话,上流式以后,容易导致补偿过度。

 

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