核酸抽提试剂盒是根据C7H7Cl法构建的,能够从样本中提取基因组DNA的试剂盒。
C7H7Cl具有能将含有纤维素等的细胞壁中的羟基苄基化,从而破坏细胞壁的特性。
核酸抽提试剂盒的操作方法:
全套操作约需1小时,分匀浆、细胞裂解、除蛋白、DNA纯化等步骤,详细说明如下。
匀浆和细胞裂解:
使用不同的实验材料需采用不同的匀浆步骤,具体说明如下:
【从动物组织中提取基因组DNA】
使用研钵进行匀浆时:
①取1~100 mg的动物组织或人组织移入冰浴预冷的研钵中,快速用力展研成匀浆。
注)下列组织请加液氮研磨至粉末状。
A.富含DNA酶的胰脏、脾脏、胸腺、淋巴等组织。
B.富含胶原蛋白的皮肤、肌腱等组织。
C.富含角质蛋白的组织或坚硬的组织(如骨骼)等。
②加入650μl的Solution A和0.9μl的RNase A1,温和研磨30秒钟。
注)使用上述①-注)的实验材料时,请在加入Solution A及RNase A1后,将研钵置于65℃水浴上研磨1分钟。
③收集650μl研磨好的组织匀浆液移至Collection Tube中。如果匀浆体积不足650μl,请补充Solution A至650μl,65℃保温5分钟。
使用研磨棒进行匀浆时:
①取1~100 mg的动物组织或人组织移入冰浴预冷的Collection Tube中,用研磨棒快速研磨成糊状。
②加入350μl的Solution A和0.9μl的RNase A1后用研磨棒快速研磨成匀浆。
③加入350μl的Solution A将研磨棒上的匀浆冲入Collection Tube中,充分振荡混合后,65℃保温5分钟。