技术文章

掌握要点合理使用凋亡试剂盒点击次数:269 发布时间:2021-04-22

  细胞凋亡是指为维持有机体内环境稳定,由基因控制的细胞自主的有序的死亡。正常情况下任何细胞在形成过程中发生的异常都会通过凋亡消除。例如体内的癌细胞增长为肿瘤的过程会受细胞凋亡的引导而被抑制。然而在抑癌基因p53出现问题时,凋亡就不会诱导发生,从而导致癌细胞的不断增长。细胞凋亡可以通过细胞形态的变化或生物化学的变化来检测。目前常用的指标有caspase活性变化、DNA碎片、磷脂酰丝氨酸的外翻等。AnnexinV染色的细胞可以用于检测细胞凋亡早期的细胞膜变化。在细胞凋亡早期,膜磷脂酰丝氨酸由脂膜内侧翻向外侧。AnnexinV是一种分子量为35~36kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白,与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力,可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜特异性结合,因此AnnexinV被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。用绿色荧光FITC标记的AnnexinV通过流式细胞仪或荧光显微镜可以检测到细胞凋亡的发生。
 
  凋亡试剂盒的操作流程:
 
  (Ⅰ)诱导凋亡的操作步骤  1.制备细胞(Jurkatcell)悬液(1×106cells/ml)2.加入终浓度为1μg/ml的凋亡诱导剂(Staurosuporine)3.在37℃下培养3.5h。*Staurosuporine用于诱导Jurkatcell凋亡。较佳诱导条件请根据实验的细胞类型与诱导剂调整。
 
  (Ⅱ)AnnexinV染色操作步骤:
 
  1.将细胞悬液转移到离心管中,1,000rpm离心3min,取出上清液。
 
  2.加入PBS,1,000rpm离心3min,去除上清液。再重复本步操作一次。
 
  3.用之前准备好的1×AnnexinVBindingSolution制备细胞终浓度为1×106cells/ml的细胞悬液。细胞悬液体积根据实验目的自行调整,一般推荐不少于500μl细胞悬液。
 
  4.取100μl步骤3中制备的细胞悬液,加入到一个新的tube中。
 
  5.向细胞悬液中加入5μlAnnexinV,FITC结合物,再加入5μlPISolution。
 
  6.室温下避光培养15min。
 
  7.加入400μl1×AnnexinVBindingSolution,请在在1小时内检测。
电话:
13788993509
13788995069
021-64133189
传真:
021-64129208
陈小姐点击这里给我发消息
徐小姐点击这里给我发消息
朱小姐点击这里给我发消息
 
安全联盟站长平台

化工仪器网

推荐收藏该企业网站