样本制备是实验的步骤，也是决定实验成败的关键步骤，获得的蛋白质样品必须均质、可溶，并解离成单个多肽亚基，且尽量减少相互间的聚集，使其仅依赖本身的分子量大小进行分离。常见的样本来源有重组蛋白、细胞和组织等。

 蛋白提取的总原则和注意事项：

    1.尽可能提取*或降低样本复杂度，只集中提取目的蛋白；

    2.保持蛋白处于溶解状态（通过裂解液的pH盐浓度，表面活性剂，还原剂等的选择）；

    3.提取过程防止蛋白降解、聚集、沉淀、修饰等（低温操作，加入合适的蛋白酶和磷酸酶抑制剂）；

    4.尽量除去核酸、多糖、脂类等干扰分子（通过加入核酸酶或采取不同提取策略）；

    5.样品分装，长期于-80℃保存，避免反复冻融。

    细胞裂解：

    1.培养的细胞经预冷的PBS漂洗2次，裂解液中加入蛋白酶和磷酸酶抑制剂；

    2.吸尽PBS，加入预冷的裂解液（1mlper107cells/100mmdish/150cm2flask）；

    3.用细胞刮子刮取贴壁细胞，将细胞及裂解液温和地转移至预冷的微量离心管中；

    4.4℃摇动30mins；

    5.4℃，12000rpm离心20mins；

    6.轻轻吸取上清，转移至新预冷的微量离心管中置于冰上，即为蛋白样本，弃沉淀。

    组织裂解：

    1.用灭菌的预冷的工具分离目的组织，尽量置于冰上以防蛋白酶水解；

    2.将组织放在圆底微量离心管或EP管中，加入液氮冻结组织于冰上匀质研磨，长期可保存于-80℃；

    3.每5mg加入约300ul预冷的裂解液，冰浴匀浆后置于4℃摇动2小时，裂解液体积与组织样本量有适当比例（蛋白浓度至少达0.1mg/ml，理想的蛋白浓度应为1-5mg/ml）；

    4.4℃，12000rpm离心20mins，轻轻吸取上清，转移至新预冷的微量离心管中置于冰上，即为蛋白样本，弃沉淀。