Elisa试剂盒应用的范围很广，而且正在不断地扩大，原则上Elisa试剂盒可用于检测一切抗原、抗体及半抗原，可以直接定量测定体液中的可溶性抗原。Elisa试剂盒的灵敏度、特异性、精密度、稳定性等因素都会影响Elisa检测的结果。
 

　　在Elisa试剂盒中一般有两次抗原抗体反应，即加标本和加酶结合物后。抗原抗体反应的完成需要有一定的温度和时间，这一保温过程称为温育，有人称之为孵育，在ELISA中似不恰当。
 

　　ELISA属固相免疫测定，抗原、抗体的结合只在固相表面上发生。以抗体包被的夹心法为例，加入板孔中的标本，其中的抗原并不是都有均等的和固相抗结合的机会，只有较贴近孔壁的一层溶液中的抗原直接与抗体接触。这是一个逐步平衡的过程，因此需经扩散才能达到反应的终点。Elisa试剂盒在其后加入的酶标记抗体与固相抗原的结合也同样如此。
 

　　温育常采用的温度有43℃、37℃、室温和4℃(冰箱温度)等。37℃是实验室中常用的保温温度，也是大多数抗原抗体结合的合适温度。ELISA试剂盒在建立ELISA方法作反应动力学研究时，实验表明，两次抗原抗体反应一般在37℃经1-2小时，产物的生成可达。为加速反应，可提高反应的温度，有些试验在43℃进行，但不宜采用更高的温度。抗原抗体反应4℃更为*，Elisa试剂盒在放射免疫测定中多使反应在冰箱中过夜，以形成zui多的沉淀。但因所需时间太长，在ELISA中一般不予采用。