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细胞株培养技术说明与分享点击次数:276 发布时间:2020-06-11

细胞株是用单细胞分离培养或通过筛选的方法,由单细胞增殖形成的细胞群。细胞株的特殊性质或标志必须在整个培养期间始终存在。国内资深的细胞株是通过选择法或克隆形成法从原代培养物或细胞系中获得的具有特殊性质或标志的培养细胞。下面分享细胞株培养技术的三大要点:

1、取材

细胞株培养的材料主要来源于外科手术或活检瘤组织,取材时避免用坏死组织,要挑选瘤细胞集中和活力较好的部位,瘤性转移淋巴结或胸腹水是较好的培养材料。取材后尽快培养,因故不能立即培养者,可冻存。细胞株的培养方法及冻存方法同前述正常组织。

2、成纤维细胞排除

在细胞株培养中常混杂有一些成纤维细胞,培养时能与瘤细胞同时生长,并常压过癌细胞,导致癌细胞生长受阻以至消失,应仔细排除。排除方法常有:机械刮除法、反复贴壁法、消化排除法、胶原酶消化法等。

3、提高细胞培养存活率和生长率

根据实验经验,细胞株要经过对新环境的适应才能生长,因此不能局限于一般培养法,须采用一些特殊措施。如:用适宜底物,鼠尾胶原底层及饲细胞底层等。用细胞生长因子,根据细胞种类不同选用不同的促细胞生长因子,如胰岛素、雌激素等。也可以考虑动物媒介培养。

总而言之,在细胞株待转化细胞数量明显上升,并出现细胞团块后,可转入细胞培养瓶中,加培养基,常温培养半个月,一般每隔一周观察一次,决定是否换液、传代,靠谱的细胞株的每个步骤都至关重要。细胞生长达一定数量后冻存,冻存前应进行核型分析和存档。

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