1.包被抗体：用包被缓冲液稀释特异性抗体球蛋白至*适浓度（1～10μg/ml），每凹孔加0.3ml，4℃过夜，或37℃水浴3小时，贮存冰箱。
2.洗涤：移去包被液，凹孔用洗涤缓冲液（含0.05%吐温-20）洗3次，每次5分钟。
3.分2组，a组加酶标记抗原和被检抗原混合液0.2ml，b组只加酶标记抗原液0.2ml，37℃作用1～2小时。（混合液可作成不同稀释度）
4.洗涤：移去包被液，凹孔用洗涤缓冲液（含0.05%吐温-20）洗3次，每次5分钟。
5.加入0.2 ml底物溶液于每个凹孔（OPD或OT），室温作用30分钟（另作一空白对照，0.4ml底物加0.1ml终止剂）。
6.加终止剂：每凹孔加2M H2SO4或2M柠檬酸0.05ml。
7.用酶标比色计测定a、b两组OD值，并求出a、b、OD值的差数。
本方法首先将特异性抗体吸附于固相载体表面，我们把抗原和抗体吸附到固相载体表面的这个过程，称为包被，也可叫做致敏。经洗涤后分成两组：一组加酶标记抗原和被测抗原的混合液，而另一组只加酶标记抗原，再经孵育洗涤后加底物显色，这两组底物降解量之差，即为我们所要测定的未知抗原的量。
这种方法所测定的抗原只要有一个结合部位即可，因此，对小分子抗原如激素和药物之类的测定常用此法。该法的优点是快，因为只有一个保温洗涤过程。但需用较多量的酶标记抗原为其缺点。
更新时间：2019-09-25 
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