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细胞因子生物学活性检测和浓度测定方法点击次数:1164 发布时间:2018-02-24

   一:细胞因子是由细胞分泌的具有生物活性的小分子蛋白物质的统称。在免疫应答过程中,细胞因子在免疫调节、炎症应答、肿瘤转移等生理和病理过程中起重要作用。细胞因子的检测不仅是基础免疫研究的有较手段,同时在临床疾病诊断、病程观察、疗效判断及细胞因子治疗监测方面具有重要价值。
  但是,由于细胞因子在体内的含量甚微,给细胞因子的检测带来困维,细胞因子的检4.细胞病变抑制法
  病毒可造成靶细胞的损伤,干扰素等则可抑制病毒所导致的细胞病变,因此可利用细胞病变抑制法检测这类因子。
  二、免疫学检测法
  细胞因子均为蛋白或多肽,具有较强的抗原性。随着重组细胞因子的出现,可较方便地获得细胞因子的特异性抗血清或单克隆抗体,因此可利用抗原抗体特异性反应的特性,用免疫学技术定量检测细胞因子。尽管细胞因子种类繁多,只要获得了针对某一因子的特异性抗体,为大规模检测临床病人血清中细胞因子的含量提供了方便。本法仅测定细胞因子的抗原性,与该因子活性不一定相平行,因此要了解细胞因子的生物学效应,必须结合生物学检测法。
  三、分子生物学方法
  这是一类利用细胞因子的基因探针检测特定细胞因子基因表达的技术。目前所有公认的细胞因子的基因均已克隆化,故能较容易地得到某一细胞因子的cdna探针或根据已知的核苷酸序列人工合成寡聚核苷酸探针。利用基因探针检测细胞因子mrna表达的方法多种多样,常使用斑点杂交、northern blot、逆转录pcr,细胞或组织原位杂交等。实验的关键在于制备高质量的核酸探针和获得合格的待测物标记并与目的基因互补的dna区域段或单链dna、rna。根据其来源可分为cdna探针、寡核核苷酸探针、基因组基因探针及dna探针等。其中cdna探针和人工合成寡核苷酸探针常用于斑点杂交及northern blot,而rna探针因穿透性好更适用于原位杂交。核酸探针技术的应用已经程序化,以cdna探针为例主要包括:①质粒dna的提取;②靶dna区域段的分离;③靶dna区域段标记;④待测样品mrna的提取;⑤标记cdna探针对待检样品的杂交;⑥放射自显影或显色分析。近年来出现的rt-pcr检测特异性mrna的方法也广泛用于细胞因子研究领域。该法具有灵敏、快速等优点,甚至从1~10个细胞中就可检出其中的特异mrna。
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