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标记的链霉卵白素-生物素法点击次数:1745 发布时间:2011-03-10

                                  标记的链霉卵白素-生物素法

www.runwelltac.com标记的链霉卵白素-生物素法(LSAB)          

标记的链霉卵白素-生物素法(LSAB法)是标记的卵白素技术,20世纪80年代开始采用。
基本试剂:
① *抗体
② 生物素化第二抗体;
③ 辣根过氧化物酶标记的链霉卵白素。
实验方法:
1. 将固定后的标本用PBS漂洗;
2. 于室温下用1%H2O2或1%H2O2甲醇浸泡涂片10~20min,用来密封内源性过氧化物酶
3. TBS漂洗3次,每次1min;
4. 在室温下用二抗的正常血清孵育20min;
5. 滴加一抗后在室温下放置1h或4℃冰箱内过夜;
6. TBS漂洗3次,每次1min;
7. 滴加二抗后于室温放置30min;
8. 将标本于生物素化的第二抗体在室温孵育10min;
9. TBS冲洗3次,每次1min;
10. 再与稀释的LSAB在室温孵育10min;
11. 重复步骤9;
12. 用DAB或AEC显色;
13. 用蒸馏水反复冲洗;
14. 用苏木精复染;
15. 封片;

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