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非限制性体干细胞的分离点击次数:1054 发布时间:2011-01-04

                               非限制性体干细胞的分离

非限制性体干细胞(USSCs)的分离

试剂和材料: 
1. 起始培养基;
2. 扩增培养基;
3. 0.05%胰蛋白酶,含EDTA;
4. PBSA;
5. T25培养瓶
 
实验方法:
1. 制备和分离脐带血来源的MNCs(CB-MNCs);
2. 如果使用冻存的CB-MNCs,复苏的细胞可以用于培养,不需要其他分离步骤;
3. 用起始培养基按5×106 —7×106个细胞/ml浓度接种到T25的培养瓶中;
4. 将细胞放在37℃,5%CO2的条件下培养,2-4周内每周一次更换培养基和细胞因子
5. 形成USSC集落后,在扩增培养基中扩增细胞;
6. 将细胞放在37℃,5%CO2的条件下培养;
7. 到达80%汇合后,用0.05%胰蛋白酶/EDTA消化细胞,并按1:3比例传代,在相同培养条件下继续培养;


 

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