免疫组化技术要点和常见问题

在免疫组化过程中，为了更好的说明问题和查找原因，设置阳性对照片（已知的高表达相应抗原的组织）和阴性对照组织片（不加一抗但是加二抗系统/不加任何抗体两组），所有操作过程应*一致。
染色弱或者没有染色（按照先后顺序，先排除一些简单的原因）：

试剂使用顺序错误或者漏加试剂重复实验，保证每一步均正确
二抗和一抗不匹配选择匹配的二抗
底物和酶不匹配选用匹配的底物
酶失活换用新的酶（将酶和底物混合，看是否显色？）
组织中没有待测抗原表达或者表达水平低使用阳性对照片
抗体浓度太低增加抗体浓度.使用不同浓度的抗体，决定*浓度
抗体孵育时间不充分延长抗体孵育时间
底物孵育不充分延长底物孵育时间
抗体储存不当，导致失效将抗体分装，低温保存 （-20 to -70 C） ，避免反复冻溶。稀释抗体在4保存1-2周，避免时间过长。或者根据说明书进行恰当的保存
一抗失效换用新的一抗
二抗失效换用新的抗体（能否成功与其它一抗配合？）
脱石腊不充分延长脱腊时间或者换用新的二甲苯
组织固定不充分或者不当增加固定时间或者改用不同的固定方法
组织固定过度减少固定时间。若已固定过度，则需使用正确的或者推荐的抗原修复方法
复染试剂与底物系统不匹配选择正确的复染试剂（不加复染剂，看是否有组织染色？）
封片剂不正确选择正确的封片剂