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RNA纯化方法及沉淀点击次数:2169 发布时间:2017-05-18

 RNA纯化要求---RNA样品中不应存在对酶(如逆转录酶)有抑制作用的有机溶剂和过高浓度的金属离子,避 免其他生物大分子如蛋白质,多糖和脂类分子的污染,排除DNA分子的污染。

一、RNA纯化方法及沉淀---有机溶剂抽提法

1、抽提

在使用RNA提取试剂进行RNA提取时,常使用进行抽提,以去除蔗糖、蛋白质等杂质,并促进水相与有机相的分离,从而达到纯化RNA的目的。抽提RNA后,一般采用异丙醇或乙醇来沉淀水相RNA。加入0.6倍水相体积的异丙醇或与水相等体积的异丙醇,室温沉淀20-30min,高速离心,可获得RNA沉淀。

2、洗涤沉淀

加入无RNase75%乙醇,将RNA沉淀震荡悬浮,使RNA沉淀中的盐离子被充分溶解。然后在离心10-30min,再次沉淀RNA。离心后,小心倒掉上清(注意不要倒出RNA沉淀),随后短暂离心,将残留在管壁上的乙醇收集到管底后,用小枪头吸净,超净台中风干1-2min(注意不要太干,否则RNA沉淀不易溶解)。

3、溶解沉淀

加入适量RNase-Free Water溶解RNA沉淀。

二、RNA纯化方法及沉淀---硅基质吸附法

随着实验方法的改进,现已发展出一种采用吸附材料纯化核酸的方法。目前较常见的有:硅基质吸附材料、阴离子交换树脂和磁珠等。硅基质吸附材料因其具有可特异吸附核酸,使用方便、快捷,不使用有毒溶剂如苯酚、等优点,成为核酸纯化的。

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