流式抗体搭配荧光素原则

       流式抗体搭配流式荧光素主要有2个原则：*，每个通道只能选择1种荧光素；第二，各个通道之间的荧光素可以随意搭配，因此需要注意：
       1、流式抗体每个通道只能选择1种荧光素。以Calibur为例说明，Calibur的FL1通道选择了Alexa Fluro488就不能选FITC ，或者选择了FITC就不能选择AlexaFluro488。Calibur的FL3通道尽管能检测PE-Texas Red, PE-Cy5, PerCP, PerCP-Cy5.5, PE-Cy7五个荧光素，但是我们搭配的时候只能选择其中1个。
       2、各个通道之间的荧光素可以随意搭配：如果客户的流式细胞仪能做4个通道，在第1个原则之下，那么每个通道随便选出1个荧光素就可以组合成4个颜色。以2跟激光的Calibur为例，Calibur各个荧光素之间可以搭配出16种组合。比如常用的搭配是F I T C（ F L 1 ）＋P E（F L 2）＋PerCP（FL3）+APC（FL4）, 这个搭配组合可以更改成Alex Fluro（FL1）＋PE（FL2）＋PerCP（FL3）+APC（FL4）, 或者FITC（FL1）＋PE（FL2）＋PerCP（FL3）+Alex Fluro（FL4），或者FITC（FL1）＋PE（FL2）＋PE-Cy5（FL3）+APC（FL4）等等。总之，在第1原则之下，我们可以随意搭配和组合各个荧光素。但是需要注意的是，APC和PE-Cy5一起使用的话，上流式以后，容易导致补偿过度。

所以说，以上也是流式抗体荧光素搭配的注意事项！