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免疫组化抗原修复注意事项点击次数:1129 发布时间:2016-11-24

免疫组化抗原修复注意事项

1、pH的应用范围及选择

抗原修复液的pH非常重要,有效的抗原修复pH要比修复液的化学成分更重要,同样的修复液随着pH的升高染色的强度逐渐增强,但zui佳pH范围为6.0-10.0。目前大家公认的的抗原修复液是pH6.0的柠檬酸盐缓冲液和pH8.0的EDTA缓冲液。作为通用修复液碱性pH的修复液要比酸性的有效,而对固定很长时间旧的存档组织,酸性pH的修复液则优于碱性的修复液。

2、抗原修复时应选择zui佳温度

70-90℃的温度对未经固定的蛋白质可发生变性,但经福尔马林固定的蛋白质,温度必须达到92℃以上方能使其变性。研究结果显示,温度为92-98℃是合适的,95℃效果。

3、抗原修复液必须遵循自然降温规律,否则效果不好或达不到抗原修复的目的

抗原修复持续时间过后,取出放于室温中让其慢慢地降温,不能为了争取时间,强行用冰块或冷水使其降温。这是因为当高温中的抗原蛋白分子链脱离了其他的束缚或联结,要有一个自然环境让其自然放松下来,随着温度的降低,它们会慢慢地恢复原来的形态和构型。

4、尽量使用足量的抗原修复液

应用于抗原修复的液体,一定要充足,防止切片干涸。应用大量的抗原修复液时,由于它的量较大,可延缓液体的沸腾时间,增加切片受微波辐射的量,对抗原修复将达到彻底。

 

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