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常用培养基的制备点击次数:1315 发布时间:2016-11-16

培养基(Medium)是供微生物、植物和动物组织生长和维持用的人工配制的养料,一般都含有碳水化合物、含氮物质、无机盐(包括微量元素)以及维生素和水等。以下介绍培养基的制备流程:
一、配料
培养基处方准确称取各种成分,先在三角烧瓶中加入少量蒸馏水,再加入各种成分,以防蛋白胨等粘附于瓶底,然后再以剩余的水冲洗瓶壁。
二、溶化
将各种成分混匀于水中,以流通蒸气溶化半小时,如在电炉上溶化应随时搅拌,如有琼脂成分时更应注意防止外溢。溶化完毕,补足失去的水分。
三、矫正pH
1.pH测定
取与标准管同口径的试管(通常用华氏试管)3支,于第1、3管各加入欲测定pH的的培养基5ml,并于管中加入0.2g/L的酚红0.25ml作为测定管,混匀;于第2管加入蒸馏水5ml,第4管为pH标准比色管。
2.pH的校正
若测定管过酸或过碱可用0.1mol/L氢氧化钠或0.1mol/L盐酸溶液矫正,直至颜色与标准管相同为止,加碱或加酸时要缓慢,每加1滴后要充分混匀,比色后再加第2滴(有时仅加半滴)准确记录加入的量。
3.计算
设5ml培养基矫正pH至7.4时需0.1mol/L氢氧化钠0.15ml,现有培养基4990ml,需加氢氧化钠的量可按下列方法计算:5∶4990=0.15∶X
X=0.15×4990/5=149.7(ml)
如将此0.1mol/L的氢氧化钠改用1mol/L的氢氧化钠时,则需14.9ml即可医学教育网搜集|整理。
四、过滤澄清
培养基配制后一般都有沉渣或混浊出现,需过滤成清晰透明后方可使用,常用的过滤方法如下:
1.液体培养基
液体培养基必须清晰,以便观察细菌的生长情况,常用滤纸过滤,亦可在加热前加入用水稀释的鸡蛋白(1000ml培养基用1个鸡蛋白)在100℃加热后保持60~70℃,40~60分钟,使其不溶性物质附于凝固的蛋白上而沉淀,然后再用虹吸法吸出上清液或以滤纸过滤。
2.固体培养基
如系琼脂培养基,于加热融化后需趁热以绒布或两层纱布中夹脱脂棉过滤;亦可用自然沉淀法,即将琼脂培养基盛人铝锅或广口搪瓷容器内,以高压(103.43kPa)蒸汽融化15分钟后,静置高压锅内,次日将琼脂倾出,用刀将底部沉渣切去,再融化即可收清晰的琼脂培养基。
五、分装
1.根据需要将培养基分装于不同容量的三角烧瓶、试管中。分装的量不宜超过容器的2/3以免灭菌时外溢。
2.琼脂斜面分装量为试管容量的1/5,灭菌后须趁热放置成斜面,斜面长约为试管长的2/3
3.半固体培养基分装量约为试管长的1/3,灭菌后直立凝固待用。
4.高层琼脂分装量约为试管的1/3,灭菌后趁热直立,待冷后凝固待用。
5.液体培养基分装于试管中,约是试管长度的1/3.
6.琼脂平板:将灭菌(或加热融化)后的培养基冷至50℃左右,以无菌手续倾人灭菌平皿内,内径9cm的平皿倾注培养基约13~15ml,轻摇平皿底,使培养基平铺于平皿底部,待凝固后即成,倾注培养基时,切勿将皿盖全部启开,以免空气中尘埃及细菌落入。
新制成的平板培养基(简称平板),表面水分较多,不利于细菌的分离,通常应将平皿倒扣搁置于37℃培养箱内约30分钟待平板平面干燥后使用。
六、灭菌
不同成分、性质的培养基,可采用不同的灭菌方法。高压蒸汽灭菌法:高压灭菌的温度与时间随培养基的种类及数量的不同有所差别,
一般培养基少量分装时高压(103.43kPa)灭菌15分钟即可,培养基分装量较大时,可高压(103.43kPa)灭菌30分钟,含糖的培养基高压(55.16kPa)灭菌15分钟。以免糖类被破坏。
七、检定
每批培养基制成后须经检定方可使用,检定时将培养基放37℃温箱内培养24小时后,证明无菌,同时用已知菌种检查在此培养基上生长繁殖及生化反应情况,符合要求者方可使用。
八、保存
制好的培养基,不宜保存过久,以少量勤做为宜。每批应注明名称,分装量,制作日期等,放在4℃冰箱内备用。

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